Общие требования к качеству медицинских иммунобиологических препаратов
При разработке своих национальных требований к качеству МИБП подавляющее число стран руководствуется рекомендациями ВОЗ. Экспертный комитет по биологической стандартизации ВОЗ рассматривает, одобряет и публикует рекомендации практически по всем видам МИБП. В рекомендациях отражены все этапы производства и контроля МИБП, начиная с входного контроля сырья и кончая контролем конечного продукта. В документах ВОЗ даются преимущественно качественные показатели МИБП, хотя по наиболее важным из них (безопасность, специфическая активность и др.) приводятся цифровые данные. По большинству показателей лимиты устанавливаются национальными органами контроля отдельных стран. Эти показатели в требованиях разных стран могут отличаться друг от друга.
ВОЗ считает целесообразным разрабатывать международные требования только в том случае, если МИБП лицензирован хотя бы в одной стране и на него есть национальные требования. Тем не менее по некоторым новым МИБП, например синтетическим пептидным вакцинам и ДНК-вакцинам, которых еще нет в практике, ВОЗ разработала наставления (1997), носящие общий рекомендательный характер.
Общие требования касаются прежде всего безопасности и специфической активности МИБП. Для обеспечения безопасности вакцин должны быть изучены и охарактеризованы свойства вакцинного штамма, клеточного субстрата, свойства полуфабриката и конечного продукта (стерильность, токсичность, пирогенность, химические и биологические примеси, добавки, контаминация и др.).
Требования к специфической безопасности вакцин касаются полноты инактивации токсинов, бактерий, вирусов, отсутствия остаточной вирулентности (или реверсии вирулентности) и контаминации, наличия генетической стабильности и генетической гомогенности вакцинного штамма.
Специфическая активность вакцин включает такие показатели, как количество антигена в единице объема ^/мл, ЕС/мл), количество живых или убитых микробных клеток, составляющих основу вакцины, уровень специфических антител в сыворотке крови животных, иммунизированных данной вакциной, степень защищенности таких животных от введения разрешающей дозы инфекционного агента и др.
Посевной материал, который используется для приготовления вакцины, готовится из производственного штамма. Одна и та же серия посевного материала может использоваться в течение десятков лет. Для приготовления вирусного посевного материала применяют вирус, который прошел минимальное число пассажей от первичного посевного вируса, из которого была приготовлена вакцина при ее лицензировании. Критерием, ограничивающим число пассажей, является генетическая стабильность вакцинного штамма. Следует контролировать посевной вирус на контаминацию. Хранение посевного вируса и процесс производства вакцин не должны менять свойства вируса. Эти требования к посевному вирусу, используемому для приготовления живых и инактивирован- ных вакцин, должны быть одинаковыми. Штамм вируса, используемый для приготовления посевного материала, должен быть аттестован и содержать сведения об истории его выделения, методе аттенуации, контаминации, иммуногенности, безопасности, а также о нейровирулентности, если штамм применяется для производства живых вакцин.
Посевной вирус должен содержаться в условиях, обеспечивающих стабильность его генотипа и постоянство свойств при его хранении и репродукции.
Первичные и перевиваемые клеточные культуры. Ни один вид клеток, используемых для приготовления вирусных вакцин, не является абсолютно безопасным в отношении возможной контаминации посторонними вирусами. Каждый вид клеток, который может быть использован для производства вакцин, должен быть охарактеризован по следующим показателям: история линии клеток, среда культивирования клеток, характеристика динамики размножения клетки in vitro, замораживание и хранение посевного пула диплоидного штамма клеток, кариологическая характеристика, контроль на наличие контаминантов, контроль на неопластические свойства штамма, аттестация клеточных культур и протоколы ведения диплоидных клеток.
Первичные клеточные культуры используются для приготовления вакцин уже в течение нескольких десятилетий. Применяются куриные эмбрионы (для вакцин против гриппа, бешенства, клещевого энцефалита, желтой лихорадки), эмбрионы японских перепелов (для вакцин против кори и паротита), клетки почек обезьян (клетки почек зеленых мартышек для изготовления полиоми- елитной вакцины), клетки собак, кроликов, хомяков. К недостаткам метода первичных культур относятся высокая чувствительность к вирусам, возможная предшествующая контаминация, необходимость контроля на микробную контаминацию отдельных животных и птиц, а также колоний, где они разводятся.
Диплоидные клетки человека не обладают туморогенностью, и из них можно создать клеточный банк, что удобно для производства вакцин. Вместе с тем для культивирования диплоидных клеток необходимы ростовые факторы.
Наиболее перспективными и удобными для производства МИБП являются перевиваемые клетки. К таким клеткам относятся пассированные раковые клетки человека и животных. Перевиваемые клетки неприхотливы к питательной среде, из них можно создать банк клеток и получить биомассу в большом объеме. Для приготовления вакцин следует применять только те клеточные линии, которые не обладают онкогенными свойствами.
Недостатком работы с перевиваемыми клетками является необходимость очистки вакцин от клеточной ДНК, которая теоретически может обладать туморогенной активностью, вызывать активацию протоонкогенов или инактивацию супрессорных генов после встраивания чужеродной ДНК в клеточный геном. Недавно ВОЗ увеличила лимит клеточной ДНК со 100 пг до 10 нг на 1 дозу вакцины, хотя современные методы очистки позволяют уменьшить концентрацию клеточной ДНК в вакцинах до минимальных концентраций. Для энтеральных вакцин лимит чужеродной ДНК не установлен в связи с минимальным риском возникновения осложнений.
Трипсин, бычья сыворотка и сывороточный альбумин, необходимые для приготовления взвеси клеток и их культивирования, можно использовать только из тех территорий, которые свободны от прионных заболеваний. Для производства МИБП нельзя применять клетки нервной ткани.